《中國藥典》（現行版本為 2025 年版）中未對集菌儀的具體操作步驟進(jìn)行詳細圖文描述，但在 通則 1101 無(wú)菌檢查法 和 通則 1121 微生物限度檢查法 中，明確規定了集菌儀在 薄膜過(guò)濾法 中的應用原則和技術(shù)要求。以下是基于藥典通則內容提煉的操作規范及關(guān)鍵要點(diǎn)： 

一、適用范圍 

集菌儀主要用于藥品、生物制品等的 無(wú)菌檢查（確認樣品是否含活菌）和 微生物限度檢查（測定樣品中微生物數量及控制菌），通過(guò) 薄膜過(guò)濾法 實(shí)現以下操作： 樣品過(guò)濾：截留微生物于濾膜表面，排除樣品抑菌成分或富集低濃度微生物。 沖洗與中和：用沖洗液或中和劑消除樣品干擾，確保后續培養準確性。 接種培養：將濾膜轉移至培養基中，觀(guān)察是否有菌生長(cháng)。 

二、核心操作流程（基于藥典通則） 

1.設備與耗材準備 集菌儀要求： 具備 蠕動(dòng)泵 驅動(dòng)管路，可調節流速（通常 0.1～100mL/min），并能保持恒定壓力。 配套 無(wú)菌集菌培養器（含濾膜，孔徑一般為 0.45μm，用于微生物限度檢查；0.22μm 用于無(wú)菌檢查）。 滅菌要求： 集菌培養器、濾膜、管路等耗材需經(jīng) 濕熱滅菌（121℃，30 分鐘）或 無(wú)菌采購（一次性無(wú)菌產(chǎn)品）。 操作需在 無(wú)菌環(huán)境 下進(jìn)行（如潔凈工作臺或無(wú)菌隔離系統）。

2. 樣品過(guò)濾 樣品制備： 按藥典要求制備供試液（如溶解、稀釋樣品），若樣品含防腐劑或抑菌成分，需先 中和（如加入中和劑、滅活酶或采用薄膜沖洗法）。 過(guò)濾操作： 將集菌培養器安裝至集菌儀，連接樣品瓶與蠕動(dòng)泵管路。 啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將供試液通過(guò)濾膜過(guò)濾（流速以不堵塞濾膜為宜，通常 5～20mL/min）。 若樣品黏稠或含顆粒，需先 預過(guò)濾（用相同孔徑濾膜或離心處理），避免濾膜堵塞。 

3. 濾膜沖洗與中和（關(guān)鍵步驟） 沖洗目的：去除樣品殘留的抑菌成分，同時(shí)避免微生物被過(guò)度沖洗損失。 沖洗液選擇： 常用 pH7.0 氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液、無(wú)菌水 或 含 0.1% 聚山梨酯 80 的緩沖液（針對油脂類(lèi)樣品）。 若樣品含抗生素，需加入 中和劑（如青霉素酶中和青霉素類(lèi)藥物）。 沖洗量： 無(wú)菌檢查：每膜沖洗量 ≤1000mL（藥典通則 1101），分次沖洗，每次不宜超過(guò) 200mL。 微生物限度檢查：每膜沖洗量 100～200mL（藥典通則 1121），可分 2～3 次完成。 

4. 接種與培養 無(wú)菌檢查： 過(guò)濾完畢后，用無(wú)菌剪刀剪下濾膜（若為封閉式集菌器，可直接開(kāi)啟培養端口）。 將濾膜 等分剪開(kāi)，分別轉移至 硫乙醇酸鹽流體培養基（培養需氧菌 / 厭氧菌）和 胰酪大豆胨培養基（培養真菌）中。 培養基用量需覆蓋濾膜，培養溫度與時(shí)間按藥典規定（如需氧菌 30～35℃培養 14 天，真菌 20～25℃培養 14 天）。 微生物限度檢查： 過(guò)濾后，直接將濾膜貼于 營(yíng)養瓊脂培養基（菌落總數）、玫瑰紅鈉培養基（霉菌酵母）或特定選擇性培養基（控制菌）表面。 倒置培養，溫度與時(shí)間按標準執行（如菌落總數 36±1℃培養 48 小時(shí)）。 

5. 結果觀(guān)察與判斷 無(wú)菌檢查： 若培養基澄清，或雖渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(cháng)，判為 符合規定；若渾濁且確證有菌生長(cháng)，判為 不符合規定。 微生物限度檢查： 計數濾膜上的菌落數，換算成每單位樣品中的微生物數量，與藥典標準對比（如口服固體制劑菌落總數≤100CFU/g）。 

三、藥典關(guān)鍵技術(shù)要求 

濾膜適用性： 濾膜需通過(guò) 無(wú)菌檢查 和 孔徑驗證（如氣泡點(diǎn)測試），確保無(wú)外源污染且截留能力符合要求。 陰性與陽(yáng)性對照： 每次檢驗需做 陰性對照（取同體積沖洗液過(guò)濾培養，應無(wú)菌生長(cháng)）和 陽(yáng)性對照（接種已知菌驗證培養基靈敏度）。 抑菌成分處理： 若樣品有抑菌性，需通過(guò) 中和試驗 確定沖洗量或中和劑用量（藥典通則 1121 附錄 Ⅵ）。 環(huán)境控制： 操作需在 萬(wàn)級背景下的局部百級潔凈區 進(jìn)行（無(wú)菌檢查），或 不低于 D 級潔凈環(huán)境（微生物限度檢查）。 四、注意事項（藥典隱含要求） 防止交叉污染： 每檢一個(gè)樣品需更換管路和濾器，若連續檢測同類(lèi)型樣品，需用 75% 酒精消毒管路接口 后再更換。 設備清潔驗證： 清潔后需進(jìn)行 微生物殘留驗證（如擦拭法檢測設備表面菌落數），確保無(wú) previous sample carryover。 記錄要求： 需記錄過(guò)濾體積、沖洗量、培養條件、菌落數等原始數據，符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規范》（GMP）追溯要求。 

五、藥典原文引用索引 

無(wú)菌檢查法： 《中國藥典》2025 年版 通則 1101《無(wú)菌檢查法》 通則 1121《非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數法》 薄膜過(guò)濾法操作細節： 附錄 ⅩⅢ C《藥品微生物實(shí)驗室質(zhì)量管理指導原則》中 “薄膜過(guò)濾法” 章節。 如需更詳細操作，建議結合那艾儀器集菌儀提供的 驗證方案（需通過(guò)藥典適用性測試）和實(shí)驗室 SOP，確保操作符合法規要求。